液氮罐内体细胞的冻存和再生原理是什么?

时间:2020-12-22 14:10来源:未知 作者:ydgmve2020yyx 点击:
一、基本原理 在不用一切标准下立即冻存体细胞时,体细胞内和外自然环境中的水都是产生冰晶,能造成体细胞内产生机械设备损害、电解质溶液上升、血浆渗透压更改、脱干、PH更改

  一、基本原理 在不用一切标准下立即冻存体细胞时,体细胞内和外自然环境中的水都是产生冰晶,能造成体细胞内产生机械设备损害、电解质溶液上升、血浆渗透压更改、脱干、PH更改、蛋白质转性等,能造成体细胞身亡。如向细胞培养液添加保护膜,可让冰度减少。

  在迟缓的冻洁标准下,能使体细胞内水分在冻洁前显出体细胞。存储在-130℃下列的超低温里能降低冰晶的产生。 体细胞再生时速率要快,使之快速根据体细胞容易损伤的-5~0℃,体细胞仍能生长发育,魅力损伤并不大。 现阶段常见的保护膜为二甲亚砜(DMSO)和凡士林,他们对体细胞不含毒性,含量小,溶解性大,易透过体细胞。

  二、操作流程 (一)冻存

  1、消化吸收体细胞(同试验二),将体细胞悬浮液搜集至离心管中。

  2、1000rpm抽滤10分鐘,弃上清液。

  3、沉定加含维护液的塑造,记数,调节至5×106/ml上下。

  4、将悬液分至冻银行存管中,每管1ml。

  5、将冻银行存管口封严。如用安瓿瓶则火苗密封,密封一定要严,不然再生*易出現崩裂。

  6、贴标签,注明体细胞类型,冻存时间。冻银行存管外拴一金属材料吊物和一轻绳。

  7、按以下次序减温:室内温度→4℃(20分鐘〕→电冰箱冷藏室(30分鐘)→低温箱(-30℃1钟头)→汽态氮(30分鐘)→液态氮。 留意:实际操作时要当心,以防液态氮冻伤。液态氮定期维护,随时随地填补,絕對不可以蒸发整洁,一般30立升的液态氮可用1~1.5月。

  (二)再生

  1、提前准备一个茶缸或1000ml的烧毁,内窗2/3杯37℃的温开水。

  2、从液态氮中取下冻银行存管、快速放置温开水中并持续搅拌。使冻银行存管中的冻存物在1分鐘以内溶化。 3、开启冻银行存管,将体细胞悬浮液吸进离心管中。

  4、1000rpm抽滤10分鐘,弃去上清液。

  5、沉定加10ml细胞培养液,吹打匀称,再抽滤10分鐘,弃上清液。

  6、加适度培养液后将体细胞迁移至塑造瓶中,37℃塑造,第二天观查生长发育状况。

  三、实验试剂和器械 器械:液氮罐、冻银行存管(塑胶螺旋灯专用型冻银行存管或安瓿瓶)、离心管、塑料吸管、离心脱水机等 实验试剂:0.25%胰酶、培养液、含保护膜的培养液(即冻存液) 附:冻存液配置: 培养液添加凡士林或DSMO,使其终浓度值达5—20%。保护膜的类型和使用量视不一样体细胞而不一样。选好后4℃下储存。

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