如何利用液氮将菌种在-80℃低温冷冻保藏

时间:2020-06-17 10:20来源:未知 作者:ydgmve2020yyx 点击:
将菌种保藏在-80 ℃冰箱中以减缓细胞的生理活动进行冷冻的一种保藏方法。 自增压液氮罐 厂家分享其操作步骤如下: *先做好安瓿管的准备 安瓿管材料以中性玻璃为宜。清洗安瓿管时
将菌种保藏在-80 ℃冰箱中以减缓细胞的生理活动进行冷冻的一种保藏方法。自增压液氮罐厂家分享其操作步骤如下:

*先做好安瓿管的准备

安瓿管材料以中性玻璃为宜。清洗安瓿管时,先用2%盐酸浸泡过夜,自来水冲洗干净后,用蒸馏水浸泡至pH中性,干燥后、贴上标签,标上菌号及时间,加入脱脂棉塞后,121 ℃下高压灭菌(15~20) min,备用。

如何利用液氮将菌种在-80℃低温冷冻保藏

其次要做好保护剂的选择和准备

保护剂种类要根据微生物类别选择。配制保护剂时,应注意其浓度及pH值,以及灭菌方法。如血清,可用过滤灭菌;牛奶要先脱脂,用离心方法去除上层油脂,一般在100 ℃间歇煮沸2~3次,每次(10~30) min,备用。

之后注重微生物保藏物的准备

在*适宜的培养条件下将细胞培养至静止期或成熟期,进行纯度检查后与保护剂混合均匀,分装。微生物培养物浓度以细胞或孢子不少于(108-1010)个/mL为宜(以大肠杆菌(Escherichia coli)为例,为了取得每毫升1010个活细胞菌液2 mL~2.5 mL,只需10 mL琼脂斜面两支)。自增压液氮罐

采用较长的毛细滴管,直接滴入安瓿管底部,注意不要溅污上部管壁,每管分装量约(0.1~0.2) mL,若是球形安瓿管,装量为半个球部。若是液体培养的微生物,应离心去除培养基,然后将培养物与保护剂混匀,再分装于安瓿管中。分装安瓿管时间尽量要短,*好在(1~2) mL内分装完毕并预冻。分装时应注意在无菌条件下操作。

接着进行冻结保藏

将安瓿管或塑料冻存管置于-80 ℃环境中保藏。

*后,咱们还得知道,冷藏后如果要取出使用的复苏方法。从冰箱中取出安瓿管或塑料冻存管,应立即放置38 ℃~40 ℃水浴中快速复苏并适当快速摇动。直到内部结冰全部溶解为止,约需50 s~100 s。开启安瓿管或塑料冻存管,将内容物移至适宜的培养基上进行培养。自增压液氮罐
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